基因工程药学

第一章 基因工程药物概论
第一节 基因工程药物与基因治疗
一、基因工程药物
二、基因治疗
第二节 遗传工程
一、动物遗传工程
二、植物遗传工程
第三节 基因药物研究的几项前沿技术
一、反义技术
二、三螺旋DNA技术
三、DNA疫苗（核酸疫苗）
第二章 基因药物研究的基本方法
第一节 基因重组技术
一、cDNA的克隆
二、PCR扩增
第二节 重组蛋白的表达
第三节 蛋白质设计
一、蛋白质变异
二、蛋白质嵌合物
第四节 基因工程技术在药物研究中的应用
一、细胞膜受体作为药物研究的靶点
二、抗原表型显示文库
三、转基因动物
四、基因治疗
五、基因工程产品
第三章 基因工程中常用的酶
第一节 限制性核酸内切酶
一、命名和分类
二、Ⅱ类限制酶
第二节 DNA连接酶
第三节 DNA聚合酶
一、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ
二、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow酶）
三、T4 DNA聚合酶
四、T7 DNA聚合酶
五、测序酶
六、逆转录酶
七、Taq DNA聚合酶
八、末端转移酶
第四节 核酸修饰酶
一、碱性磷酸酶
二、T4多核苷酸激酶
第五节 其他酶
一、BAL 31核酸酶
二、S1核酸酶
三、绿豆核酸酶
四、核糖核酸酶
五、脱氧核糖核酸酶Ⅰ
六、核酸外切酶
第四章 聚合酶链反应
第一节 概述
一、原理
二、典型的PCR操作
第二节 反应条件
一、缓冲液
二、模板核酸
三、引物
四、底物(dNTP）
五、酶
六、反应条件的选择
第三节 引物的设计
第四节 耐热DNA聚合酶
第五节 污染的控制
一、预防
二、污染源的追踪
三、处理
第六节 标本的制备
第七节 PCR技术的新进展
一、反向 PCR
二、一步法扩增
三、标记引物PCR
四、定量PCR
五、PCR固相分析法
六、DNA单链构象多态性的PCR检测技术
七、免疫PCR
八、锚定PCR
九、不对称PCR
十、差异展示PCR
十一、多重PCR
十二、着色互补PCR
十三、碱基替代PCR
十四、单一特异引物PCR
十五、臆断引物PCR
十六、cDNA末端的快速扩增
第八节 应用
一、遗传性疾病的基因诊断
二、检测病毒
三、检测癌基因
四、法医学中的应用
五、性别鉴定
六、其他
第五章 基因文库的构建
第一节 基因组文库
一、载体
二、外源DNA片段
三、连接和包装
四、保存和扩增
五、基因组文库的调用
第二节 cDNA文库的构建
一、mRNA的分离
二、cDNA第一链的合成
三、cDNA第二链的合成
四、载体
五、cDNA的克隆
六、λ噬菌体文库的扩增
第六章 定点突变
第一节 基本原理
一、概述
二、操作程序
第二节 方法
一、盒式诱变
二、寡核苷酸引物诱变
三、PCR诱变
第三节 应用
第七章 基因的克隆与测序
第一节 目的基因的克隆
一、材料的选择
二、DNA片段的制备及克隆
三、目的基因与载体的连接
四、目的基因的转入
五、重组体的筛选
第二节 基因测序
一、Sanger测序法
二、化学降解法
三、基因测序的策略
四、DNA自动测序
第三节 克隆基因的新方法
一、外元捕捉法
二、外元扩增法
三、编码序列富集法
四、岛屿获救PCR法
五、核不均一RNA法
六、消减杂交法和差别显示法
七、动物园杂交法
第四节 实验方法的改进
第八章 表达载体的构建
第一节 原核表达载体的构建
一、调控元件
二、融合蛋白型表达载体
三、非融合型表达载体
四、分泌型表达载体
五、其他表达载体
第二节 哺乳动物表达载体的构建
一、功能元件
二、筛选标记
三、真核病毒序列
四、报告基因
五、其他表达系统
第九章 真核基因在原核生物中的表达及调控
第一节 概述
一、大肠杆菌表达系统的特点
二、表达真核基因的条件
第二节 表达载体的构建
一、启动子
二、转录终止子
三、核糖体结合位点
第三节 真核基因在大肠杆菌中的表达形式
一、胞内表达
二、蛋白分泌型表达
第四节 表达的调控
一、DNA水平的调控
二、转录水平的调控
三、翻译水平的调控
四、翻译后水平的调控
五、影响表达的其他因素
第五节 表达蛋白的提取和纯化
一、提取
二、纯化
三、检测
第十章 目的基因在真核生物中的表达与调控
第一节 真核生物中的表达与调控
一、转录前的基因调控
二、转录水平的调控
三、转录后水平的调控
四、翻译水平的调控
五、翻译后水平的调控
六、内含子对基因表达的调控
第二节 真核生物表达系统
一、酵母表达系统
二、昆虫细胞表达系统
三、哺乳动物细胞表达系统
第十一章 蛋白产物的分离纯化
第一节 步骤
一、细胞的破碎
二、溶剂萃取
三、离心
四、析出
五、柱层析
六、膜分离
七、蛋白的复性
第二节 分离路线
第三节 应用
第十二章 干扰素
第一节 概述
一、序列结构
二、分类
三、生物学活性
四、传统方法生产干扰素
第二节 基因工程生产干扰素
一、克隆及基因文库的构建
二、基因文库的调用
三、表达方法
四、提取、纯化及鉴定
五、活性检测
六、新型干扰素
第三节 应用
一、临床治疗方面
二、基础研究方面
第十三章 白细胞介素
第一节 概述
第二节 IL-2
一、基因结构
二、蛋白质结构和理化性质
三、IL-2基因的转录、激活及调控
四、制备
五、检测
六、生物学活性
七、应用
第三节 IL-4
一、基因结构
二、蛋白质结构和理化性质
三、制备
四、检测
五、生物学活性
六、应用
第四节 IL-6
一、基因结构
二、蛋白质结构和理化性质
三、制备
四、检测
五、生物学活性
六、应用
第五节 IL-4受体
一、基因结构
二、蛋白质结构
三、制备
四、检测
五、生物学活性
六、应用
第十四章 促红细胞生成素
第一节 概述
一、基因和分子结构
二、来源及性质
第二节 基因工程生产EPO
一、基因克隆
二、蛋白表达
三、活性测定
第三节 EPO受体
一、基因结构
二、空间结构及功能部位
三、信息传递
第四节 应用
一、肾性贫血
二、癌性贫血
三、结缔组织性贫血
四、骨髓增生异常综合征性贫血
五、难治性贫血
六、减少外科手术输血量
第十五章 组织型纤溶酶原激活剂
第一节 概述
一、基因结构
二、氨基酸特征
三、理化性质及生物学活性
第二节 基因工程生产t-PA
一、基因克隆
二、蛋白质工程
三、生产工艺
四、基因治疗
五、检测
第三节 应用
第十六章 粒／巨噬细胞集落刺激因子
第一节 概述
一、基因结构
二、蛋白质结构
三、生物学活性
第二节 基因工程生产GM-CSF
一、基因文库的构建及克隆
二、表达
三、纯化
四、生产技术的改进
第三节 应用
一、肿瘤化疗所致的造血障碍
二、艾滋病
三、骨髓异常增生综合征(MDS)和再生障碍性贫血
四、骨髓移植
五、增强免疫功能
第十七章 粒系集落刺激因子
第一节 概述
一、基因结构
二、蛋白质结构
三、生物学活性
第二节 基因工程生产G-CSF
一、基因文库的构建及克隆
二、表达
三、纯化
四、生产技术的改进
第三节 应用
一、中性粒细胞减少症
二、白血病
三、外周造血干细胞移植
第十八章 基因工程抗体
第一节 概述
一、产生及分类
二、结构
三、基因定位
四、功能
第二节 基因工程生产抗体
一、基因文库的构建
二、嵌合抗体的制备
三、双特异性抗体的制备
四、生产技术的改进
五、纯化
六、检测
第三节 应用
一、诊断和治疗方面
二、研究方面
第十九章 基因工程疫苗
第一节 概述
一、保护性表位的筛选及鉴定
二、特定编码基因的克隆及表达
第二节 乙肝疫苗
一、酵母表达系统
二、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达系统
三、重组病毒疫苗
第三节 肿瘤疫苗
一、肿瘤的识别与排斥
二、分类
三、导入肿瘤细胞的目的基因
第四节 血吸虫疫苗
一、GST的筛选过程
二、相对分子量为62 000的肌球蛋白分子重链
三、相对分子量为40 000的原肌球蛋白
第五节 疟疾疫苗
一、裂殖子表面蛋白
二、环子孢子蛋白
三、富含丝氨酸蛋白重复抗原(SERA）
第六节 核酸疫苗
一、研究进程
二、疫苗的构建
三、接种方式、途径及对免疫效果的影响
四、免疫效果的检测
五、免疫应答反应
六、作用机制
七、应用前景
第二十章 基因诊断
第一节 概述
一、基本原理
二、特点
三、临床意义
四、技术和方法
第二节 核酸分子杂交
一、基因探针
二、杂交方法
三、杂交信号检测
第三节 PCR技术
一、原理及发展
二、原位PCR技术
三、定量PCR技术
四、PCR扩增产物的检测
第四节 限制性片段长度多态性分析
一、限制性酶切图谱直接分析法
二、RFLP间接分析法
第五节 扩增核酸和探针信号的几项新技术
一、连接酶链反应
二、Qβ复制酶系统
三、信号放大
第二十一章 基因治疗
第一节 概述
一、分类
二、治疗方式
三、治疗途径
第二节 病毒载体基因转移技术
一、逆转录病毒载体
二、腺病毒载体
三、腺病毒相关病毒载体
四、痘苗病毒载体
五、单纯疱疹病毒载体
六、人工染色体
第三节 非病毒介导的基因转移技术
一、非病毒转移法
二、病毒增强转移法
第四节 基因治疗的靶向问题
一、目的基因表达空间的定位
二、目的基因表达时序的调控
三、目的基因表达水平的调控
第五节 基因治疗的应用
一、遗传病
二、肿瘤
三、病毒性感染
第六节 前景和存在的问题
第二十二章 转基因动物和克隆动物
第一节 转基因动物生物反应器
一、由“巨鼠”到转基因动物系统
二、研究概况
三、研制转基因动物的方法
四、转基因动物反应器的研制
五、膀胱生物反应器的研制
六、应用前景
第二节 细胞周期与克隆动物
一、一个长期引起遗传学家兴趣的问题
二、细胞周期
三、Wilmut的核转移方法
四、动物克隆的一些基本方法
五、发展前景
第三节 基因剔除与特异基因的导入
一、基因剔除
二、特异基因的导入
三、Cre-LoxP系统
四、应用
附录一 新生物制品审批办法
附录二 载体系统